Tình trạng sẵn có: | |
---|---|
Bộ dụng cụ phát hiện vi-rút cúm gia cầm H5/H7/H9/RNA phân nhóm chung (Dò xét huỳnh quang PCR)
【Tên sản phẩm】
Bộ phát hiện PCR thời gian thực đối với vi-rút cúm gia cầm H5/H7/H9/Phân nhóm chung
【Bưu kiện】
50 bộ/hộp
【Thành phần chính và nội dung】
Tên | Sự chỉ rõ | Số lượng |
H5/H7/H9/Dung dịch phản ứng hóa trị ba chung | 1250µl/Ống | 1 |
H5/H7/H9/Kiểm soát tích cực chung | 250µl/Ống | 1 |
Kiểm soát tiêu cực | 250µl/Ống | 1 |
【Lưu trữ và Thời hạn sử dụng】
Bảo quản ở nhiệt độ -20±5℃, Số lần cấp đông rã đông ≤ 3 lần, thời hạn sử dụng 12 tháng.
【Người mẫu】
ABI 7500, ABI QuantStudio 5, CFX Connect, CFX Opus 96, LightCycler480, Gentiter 96E/96R, LineGene 9600 Plus và bộ khuếch đại PCR định lượng huỳnh quang khác.
【Phương pháp kiểm tra】
1. Chiết xuất axit nucleic
Bộ dụng cụ chiết xuất RNA đã được thương mại hóa có thể được thực hiện để chiết xuất axit nucleic, vui lòng làm theo hướng dẫn của bộ dụng cụ.
2. Khuếch đại PCR
2.1 Tính số lượng mẫu thử, lấy n+2 ống phản ứng PCR, cho vào mỗi ống 25µl dung dịch phản ứng.
2.2 Thêm 5µl axit nucleic của đối chứng âm tính, đối chứng dương tính và các mẫu lần lượt cho vào các ống phản ứng PCR nêu trên, ly tâm ở tốc độ 8000 vòng/phút trong vài giây và đưa vào bộ khuếch đại PCR định lượng huỳnh quang.
2.3 Các điều kiện phản ứng được thiết lập như sau:
Các thông số liên quan của bộ khuếch đại | |||
Hệ thống | Tổng thể tích: 30µl | ||
thu thập tín hiệu
| Cúm gia cầm H5/H7/H9/Tổng hợp
| Phân nhóm H5 - Kênh HEX thu thập tín hiệu huỳnh quang | |
Phân nhóm H7 - Kênh FAM thu thập tín hiệu huỳnh quang | |||
Phân nhóm H9 - Kênh Cy5 thu thập tín hiệu huỳnh quang | |||
Tổng quát - Kênh ROX thu thập tín hiệu huỳnh quang | |||
Điều kiện phản ứng PCR
| Sân khấu | Condition | số chu kỳ |
Phiên mã ngược | 55℃: 15 phút | 1 | |
tiền thoái hóa | 95℃: 30 giây | 1 | |
PCR
| 95℃: 10 giây |
40
| |
56℃: 30 giây (Thiết lập để thu thập tín hiệu huỳnh quang ở cuối giai đoạn này) |
【Diễn giải kết quả】
1. Xác định hiệu quả của bộ xét nghiệm:
(1) Kiểm soát tích cực yếu: Giá trị Ct của các kênh FAM, HEX, Cy5 và ROX ≤ 32, đường cong khuếch đại với pha hàm mũ rõ ràng.
(2) Điều khiển trống: Các kênh FAM, HEX, Cy5 và ROX không có đường cong khuếch đại hoặc đường cong khuếch đại thẳng hoặc hơi xiên, không có pha hàm mũ đáng kể và giá trị Ct ≥ 38 hoặc không có giá trị Ct.
2. Xác định kết quả:
kết quả phán đoán | kênh FAM | kênh lục giác | kênh Cy5 | kênh ROX |
Vi rút cúm gia cầm phân nhóm H5 axit nucleic dương tính | - | + | - | + |
Vi rút cúm gia cầm phân nhóm H7 axit nucleic dương tính | + | - | - | + |
Virus cúm gia cầm phân nhóm H9 axit nucleic dương tính | - | - | + | + |
Virus cúm gia cầm H5/H7 axit nucleic dương tính | + | + | - | + |
Virus cúm gia cầm H5/H9 axit nucleic dương tính | - | + | + | + |
Virus cúm gia cầm H7/H9 axit nucleic dương tính | + | - | + | + |
Vi rút cúm gia cầm H5/H7/H9 axit nucleic dương tính | + | + | + | + |
Vi rút cúm gia cầm độc lực thấp axit nucleic dương tính | - | - | - | + |
Axit nucleic của virus cúm gia cầm âm tính | - | - | - | - |
*Ghi chú:
(1) Nếu có đường cong khuếch đại pha tăng trưởng logarit và giá trị Ct ≤ 36, thì nó được đánh giá là +.Nếu không có đường cong khuếch đại hoặc giá trị Ct > 36, nó được đánh giá là -.Mẫu nghi ngờ khi 36 < giá trị Ct < 40, phải xét nghiệm lại.
(2) Nếu kết quả của bất kỳ phân nhóm H5/H7/H9 nào là + với kênh ROX -, thì phải kiểm tra lại.
【Các biện pháp phòng ngừa】
1. Việc quản lý phòng xét nghiệm phải thực hiện theo đúng quy định về quản lý phòng xét nghiệm khuếch đại gen PCR.Nhân viên phòng thí nghiệm phải được đào tạo chuyên nghiệp.Quá trình thí nghiệm được tiến hành nghiêm ngặt tại các khu vực khác nhau (Khu vực pha chế thuốc thử, khu vực pha chế bệnh phẩm, khu vực khuếch đại và phân tích sản phẩm).Tất cả các vật tư tiêu hao phải dùng một lần sau khi khử trùng.Không được sử dụng chéo các thiết bị, thiết bị và vật tư đặc biệt ở từng giai đoạn của quá trình thí nghiệm.
2. Vui lòng chuẩn bị tủ an toàn sinh học cho giai đoạn chuẩn bị thuốc thử và mẫu bệnh phẩm.Áo khoác phòng thí nghiệm, găng tay dùng một lần và pipet sẽ được thực hiện trong quá trình thí nghiệm.
3. Phải tránh đóng băng và rã đông thuốc thử nhiều lần càng nhiều càng tốt.Trước khi sử dụng, thuốc thử phải được rã đông hoàn toàn và ly tâm ở tốc độ 8000 vòng/phút trong vài giây.
4. Vui lòng đặt pipet được sử dụng trong khu vực chuẩn bị mẫu vào hộp chứa chất khử trùng và vứt bỏ chất thải sau khi khử trùng.
5. Sau thí nghiệm, bàn làm việc và pipet được xử lý bằng 10% hypochlorite hoặc 75% cồn hoặc đèn cực tím.
【Sản xuất】
Tên: Shandong Xinda Gene Technology Co., Ltd
Công ty con của Shandong Sinder Technology Co., Ltd
Địa chỉ: Tòa nhà B2, Khu công nghiệp Bandaohuigu, Đường Shungeng, Thành phố Chư Thành, Tỉnh Sơn Đông
Mã bưu điện: 262233
Điện thoại: +86 - 0532 5882 0810
Bộ dụng cụ phát hiện vi-rút cúm gia cầm H5/H7/H9/RNA phân nhóm chung (Dò xét huỳnh quang PCR)
【Tên sản phẩm】
Bộ phát hiện PCR thời gian thực đối với vi-rút cúm gia cầm H5/H7/H9/Phân nhóm chung
【Bưu kiện】
50 bộ/hộp
【Thành phần chính và nội dung】
Tên | Sự chỉ rõ | Số lượng |
H5/H7/H9/Dung dịch phản ứng hóa trị ba chung | 1250µl/Ống | 1 |
H5/H7/H9/Kiểm soát tích cực chung | 250µl/Ống | 1 |
Kiểm soát tiêu cực | 250µl/Ống | 1 |
【Lưu trữ và Thời hạn sử dụng】
Bảo quản ở nhiệt độ -20±5℃, Số lần cấp đông rã đông ≤ 3 lần, thời hạn sử dụng 12 tháng.
【Người mẫu】
ABI 7500, ABI QuantStudio 5, CFX Connect, CFX Opus 96, LightCycler480, Gentiter 96E/96R, LineGene 9600 Plus và bộ khuếch đại PCR định lượng huỳnh quang khác.
【Phương pháp kiểm tra】
1. Chiết xuất axit nucleic
Bộ dụng cụ chiết xuất RNA đã được thương mại hóa có thể được thực hiện để chiết xuất axit nucleic, vui lòng làm theo hướng dẫn của bộ dụng cụ.
2. Khuếch đại PCR
2.1 Tính số lượng mẫu thử, lấy n+2 ống phản ứng PCR, cho vào mỗi ống 25µl dung dịch phản ứng.
2.2 Thêm 5µl axit nucleic của đối chứng âm tính, đối chứng dương tính và các mẫu lần lượt cho vào các ống phản ứng PCR nêu trên, ly tâm ở tốc độ 8000 vòng/phút trong vài giây và đưa vào bộ khuếch đại PCR định lượng huỳnh quang.
2.3 Các điều kiện phản ứng được thiết lập như sau:
Các thông số liên quan của bộ khuếch đại | |||
Hệ thống | Tổng thể tích: 30µl | ||
thu thập tín hiệu
| Cúm gia cầm H5/H7/H9/Tổng hợp
| Phân nhóm H5 - Kênh HEX thu thập tín hiệu huỳnh quang | |
Phân nhóm H7 - Kênh FAM thu thập tín hiệu huỳnh quang | |||
Phân nhóm H9 - Kênh Cy5 thu thập tín hiệu huỳnh quang | |||
Tổng quát - Kênh ROX thu thập tín hiệu huỳnh quang | |||
Điều kiện phản ứng PCR
| Sân khấu | Condition | số chu kỳ |
Phiên mã ngược | 55℃: 15 phút | 1 | |
tiền thoái hóa | 95℃: 30 giây | 1 | |
PCR
| 95℃: 10 giây |
40
| |
56℃: 30 giây (Thiết lập để thu thập tín hiệu huỳnh quang ở cuối giai đoạn này) |
【Diễn giải kết quả】
1. Xác định hiệu quả của bộ xét nghiệm:
(1) Kiểm soát tích cực yếu: Giá trị Ct của các kênh FAM, HEX, Cy5 và ROX ≤ 32, đường cong khuếch đại với pha hàm mũ rõ ràng.
(2) Điều khiển trống: Các kênh FAM, HEX, Cy5 và ROX không có đường cong khuếch đại hoặc đường cong khuếch đại thẳng hoặc hơi xiên, không có pha hàm mũ đáng kể và giá trị Ct ≥ 38 hoặc không có giá trị Ct.
2. Xác định kết quả:
kết quả phán đoán | kênh FAM | kênh lục giác | kênh Cy5 | kênh ROX |
Vi rút cúm gia cầm phân nhóm H5 axit nucleic dương tính | - | + | - | + |
Vi rút cúm gia cầm phân nhóm H7 axit nucleic dương tính | + | - | - | + |
Virus cúm gia cầm phân nhóm H9 axit nucleic dương tính | - | - | + | + |
Virus cúm gia cầm H5/H7 axit nucleic dương tính | + | + | - | + |
Virus cúm gia cầm H5/H9 axit nucleic dương tính | - | + | + | + |
Virus cúm gia cầm H7/H9 axit nucleic dương tính | + | - | + | + |
Vi rút cúm gia cầm H5/H7/H9 axit nucleic dương tính | + | + | + | + |
Vi rút cúm gia cầm độc lực thấp axit nucleic dương tính | - | - | - | + |
Axit nucleic của virus cúm gia cầm âm tính | - | - | - | - |
*Ghi chú:
(1) Nếu có đường cong khuếch đại pha tăng trưởng logarit và giá trị Ct ≤ 36, thì nó được đánh giá là +.Nếu không có đường cong khuếch đại hoặc giá trị Ct > 36, nó được đánh giá là -.Mẫu nghi ngờ khi 36 < giá trị Ct < 40, phải xét nghiệm lại.
(2) Nếu kết quả của bất kỳ phân nhóm H5/H7/H9 nào là + với kênh ROX -, thì phải kiểm tra lại.
【Các biện pháp phòng ngừa】
1. Việc quản lý phòng xét nghiệm phải thực hiện theo đúng quy định về quản lý phòng xét nghiệm khuếch đại gen PCR.Nhân viên phòng thí nghiệm phải được đào tạo chuyên nghiệp.Quá trình thí nghiệm được tiến hành nghiêm ngặt tại các khu vực khác nhau (Khu vực pha chế thuốc thử, khu vực pha chế bệnh phẩm, khu vực khuếch đại và phân tích sản phẩm).Tất cả các vật tư tiêu hao phải dùng một lần sau khi khử trùng.Không được sử dụng chéo các thiết bị, thiết bị và vật tư đặc biệt ở từng giai đoạn của quá trình thí nghiệm.
2. Vui lòng chuẩn bị tủ an toàn sinh học cho giai đoạn chuẩn bị thuốc thử và mẫu bệnh phẩm.Áo khoác phòng thí nghiệm, găng tay dùng một lần và pipet sẽ được thực hiện trong quá trình thí nghiệm.
3. Phải tránh đóng băng và rã đông thuốc thử nhiều lần càng nhiều càng tốt.Trước khi sử dụng, thuốc thử phải được rã đông hoàn toàn và ly tâm ở tốc độ 8000 vòng/phút trong vài giây.
4. Vui lòng đặt pipet được sử dụng trong khu vực chuẩn bị mẫu vào hộp chứa chất khử trùng và vứt bỏ chất thải sau khi khử trùng.
5. Sau thí nghiệm, bàn làm việc và pipet được xử lý bằng 10% hypochlorite hoặc 75% cồn hoặc đèn cực tím.
【Sản xuất】
Tên: Shandong Xinda Gene Technology Co., Ltd
Công ty con của Shandong Sinder Technology Co., Ltd
Địa chỉ: Tòa nhà B2, Khu công nghiệp Bandaohuigu, Đường Shungeng, Thành phố Chư Thành, Tỉnh Sơn Đông
Mã bưu điện: 262233
Điện thoại: +86 - 0532 5882 0810